DESENVOLUPAMENT D’ANTICOSSOS (CABS)
Responsable científic: Mª Pilar Marco
La plataforma de producció d’anticossos CAbS (Custom Antibody Service), és un servei del CSIC a l’Institut de Química Avançada de Catalunya (grup NB4D) que pertany al Centre d’Investigació Biomèdica en Xarxa en Bioenginyeria, Biomaterials i Nanomedicina (CIBER-BBN) .
CABS forma part de NANBIOSIS (infraestructura de producció i caracterització de nanomaterials, biomaterials i sistemes biomèdics). NANBIOSIS és una de les 29 ICTS (Infraestructures Científiques Tècniques Singulars) recentment reconegudes pel Ministeri d’Economia i Competitivitat d’Espanya.
La plataforma disposa d’un laboratori de cultius cel·lulars, on es troben instal·lats els equips necessaris per a l’obtenció, selecció, creixement i emmagatzematge dels hibridomes (les cèl·lules productores d’anticossos). Així mateix el servei disposa de laboratoris equipats per a la síntesi de immunògens i caracterització dels anticossos produïts.
CABS ofereix els seus serveis de producció d’anticossos monoclonals i policlonals tant a grups del CSIC i CIBER-BBN, com a altres grups de recerca d’institucions públiques o privades i a empreses.
El servei s’adapta a la necessitat de cada usuari i pot produir anticossos contra proteïnes, pèptids, molècules orgàniques o altres antígens, a través de protocols estandarditzats o personalitzats, i fent especial èmfasi en la fase de disseny del inmunógen, una cosa essencial per modular la selectivitat i afinitat de l’anticòs. Cada nova petició de servei és examinada per un Comitè Científic del grup NB4D (IQAC), que elabora un informe de viabilitat, previ a l’acceptació del projecte. L’usuari roman informat de l’evolució del projecte.
Una cosa que caracteritza el servei CABS és que és un dels pocs laboratoris que ofereix el servei d’assessorament i assistència en relació a la preparació de immunògens i producció d’anticossos per a molècules de baix pes molecular, tals com pigments, hormones o anabolitzants.
Contact: cabs@iqac.csic.es
Pilar Marco
Responsable Científic
pilar.marco@iqac.csic.es
Nuria Pascual
Responsable Tècnic
nuria.pascual@iqac.csic.es
David Santos
Tècnic Superior Especialitzat
david.santos@iqac.csic.es
Disseny i síntesi d’haptens
Els haptens són molècules de baix pes molecular, massa petites per induir una resposta immune i per tant, han de ser conjugats a una molècula portadora, generalment una proteïna. Alguns haptens requereixen modificació abans que es puguin acoblar amb èxit a la macromolècula. El servei de síntesi de Haptè inclou:
- Disseny de molècules derivades de l’analit que continguin un grup funcional apropiat per a la seva conjugació a la molècula portadora. Aquest disseny és un aspecte determinant en el desenvolupament dels immunoassaigs per a les molècules petites, ja que l’estructura de l’haptè determinarà les característiques del reconeixement de l’anticòs.
- Síntesi Haptè
Els haptens funcionalitzats s’acoblaran a diferents macromolècules per obtenir els immunògens i els conjugats d’assaig necessaris per desenvolupar els immunoassaigs.
Preparació de bioconjugats
CABS ofereix serveis de conjugació d’anticossos, proteïnes i haptens amb diferents tipus de molècules com ara enzims, fluoròfors, Biotina, KLH, BSA,partícules d’or, partícules magnètiques, nanotubs, …
El servei de bioconjugació inclou diferents etapes:
- Disseny personalitzat i desenvolupament de les estratègies de conjugació que s’adaptin a les necessitats de l’usuari. Obtenció de espaiadors monofuncionals o bifuncionals, modificació de les biomolècules i avaluació de la química de la conjugació.
- Desenvolupament del procés de bioconjugació.
- Purificació i caracterització química dels bioconjugats obtinguts.
Purificació d’anticossos
La purificació d’anticossos inclou l’aïllament de l’anticòs del sèrum (anticossos policlonals), o sobrenedant de cultiu d’una línia cel·lular d’hibridoma (anticòs monoclonal).
El nivell de purificació necessària depèn de l’aplicació per a la qual volem utilitzar l’anticòs. El servei ofereix un assessorament previ de les diferents possibilitats de purificació segons les necessitats de l’usuari.
El servei ofereix metodologies de purificació, com:
- Purificació mitjançant precipitació per sulfat amònic
- Purificació per afinitat mitjançant proteïna A, proteïna G
- Purificació per afinitat amb l’antigen específic
Immunoassaigs
El servei ofereix el desenvolupament d’immunoassaigs per a la detecció i quantificació de substàncies o analits d’interès (contaminants, patògens, al·lèrgens, marcadors, etc.) en diferents mostres (biològiques, alimentàries, etc.) amb l’objectiu de diagnosticar i garantir la seguretat alimentària i mediambiental.
El desenvolupament de Immunoassaig inclou diferents etapes:
- Disseny del format del immunoassaig, matriu de la mostra, la sensibilitat i el rang de treball. Identificació de reactius necessaris, i les seves condicions per obtenir resultats òptims. Definició preliminar de les característiques d’assaig.
- Fase de Desenvolupament: Establir paràmetres d’assaig, per exemple, límit de detecció i rang de treball. Avaluació dels efectes de la matriu de l’assaig. Estudi de la reproductibilitat.
- Assaig de Validació. Avaluació de l’estabilitat dels reactius i robustesa. Mesura de-assaig inter i intra reproductibilitat, precisió i especificitat. Validació amb mostres cegues.
Plataformes de immunoassaigs: ELISA, Microarrays, etc, amb diferents formats basats en la detecció d’un anàlit o assajos multiplexats.
Producció d’anticossos
El servei, que s’adapta a la necessitat de cada usuari, pot produir anticossos contra proteïnes, pèptids, molècules orgàniques o altres antígens, a través de protocols estandarditzats o personalitzats, i fent especial èmfasi en la fase de disseny del inmunógen. El servei ofereix assessorament i assistència en relació a la preparació de inmunógeno i producció d’anticossos.
L’immunògen el pot aportar l’usuari o pot ser dissenyat i sintetitzat o bioconjugat. Tant per a la producció d’anticossos monoclonals com policlonals, els protocols i la cura dels animals d’experimentació es realitza segons les especificacions del Reial Decret 53/2013, sobre protecció dels animals utilitzats per a experimentació i altres fins científics.
Les tarifes que s’ofereixen per a la producció d’anticossos monoclonals i policlonals estan calculades segons protocols estandarditzats. No obstant això, es poden realitzar protocols personalitzats de producció d’anticossos depenent dels objectius del projecte.
PRODUCCIÓ D’ANTICOSSOS POLICLONALS:
El servei disposa d’un protocol estàndard d’immunització que inclou inoculacions mensuals amb adjuvant de Freund durant un període de 4-6 mesos. Aquest protocol es pot adaptar a les necessitats de l’usuari, depenent de l’objectiu del projecte.
Per determinar el progrés de la resposta immune, es realitza un test del sèrum dels animals immunitzats transcorreguts 10 dies des de la segona inoculació per obtenir per a fer un seguiment del títol del anticòs al llarg del procés. Al final del procés es procedeix a la exhanguinació completa de l’animal mitjançant un procés quirúrgic sota anestèsia. Habitualment s’obtenen de 50-70 ml de sèrum hiperimmune per animal.
PRODUCCIÓ D’ANTICOSSOS MONOCLONALS:
El servei de Producció d’Anticossos Monoclonals inclou les següents fases:
- Preliminar: Discussió sobre els detalls del projecte (sistema de cribratge, criteri de selecció, requisits especials), planificació i preparació del treball.
- Immunització i assaig ELISA dels sèrums dels ratolins: Immunització d’almenys 4 ratolins (Balb-C) o rates (Wistar) (de 3 a 5 immunitzacions), i anàlisi dels sèrums dels animals per a la i selecció dels exemplars per al desenvolupament del anticòs
- Fusió i cribratge: Cultiu de cèl·lules de mieloma de la línia P3x63Ag8.653. Fusió cel·lular, selecció i cribratge mitjançant ELISA. Selecció de hibridomes positius per a ser clonats.
- Clonatge i subclonatje: Clonació, cribratge i cultiu dels hibridomes positius. La clonació es durà a terme pel mètode de dilució límit. L’usuari rebrà, si ho creu convenient, el sobrenedant de cultiu necessari per cada clon positiu per testar amb seu propi sistema.
- Expansió i criopreservació: Es s’expandiran els clons seleccionats fins a obtenir 20 ml de sobrenedant de cultiu i 2 criovials per clon seleccionat.
Serveis addicionals:
- Anàlisi del Isotip dels Anticossos monoclonals generats
- Emmagatzematge de hibridomes en N2 líquid
- Creixement de hibridomes, i producció d’anticossos monoclonals a petita i mitjana escala.
Nitrogen Tank Cryomemo (Cryopal)
El dispositiu Cryomemo és un tanc de nitrogen equipat amb un kit electrònic format per indicadors de nivell i temperatura, i una interfície de control i configuració. S’utilitza per controlar i regular els nivells de nitrogen i la temperatura dels dipòsits criogènics (GT 40, Asperge, Espace i RCB) utilitzant un sensor i vàlvules de solenoide que controlen la adquisició i el subministrament de nitrogen. També s’utilitza per gestionar alarmes.
El servei d’anticossos personalitzat (CAbS) incorpora aquest nou equip dins de la seva participació en el projecte FICTS1420-27, seleccionat pel MINECO per a la cofinançament del Programa FEDER a ICTS 2014-2020.
